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重組變異鏈球菌表面蛋白的可溶性表達及抗體制備

   近日,杭州口腔醫院和口腔生物醫學工程教育部重點實驗室的研究人員共同發表基礎研究論文,旨在探討重組變異鏈球菌表面蛋白(rPAc)在大腸桿菌中可溶性表達的最佳誘導條件並制備其多克隆抗體。該研究指出,rPAc高效可溶性表達和抗rPAc多克隆抗體的制備為DNA初次免疫—蛋白質加強免疫策略的深入研究奠定了必要的物質基礎。該文發表在2012年30卷03期《華西口腔醫學雜志》上。

      通過改變pET20b(+)-AP/BL21(DE3)plysS工程菌的培養條件,提高rPAc可溶性表達水平。用純化的rPAc免疫BALB/c小鼠制備多克隆抗體,通過酶聯免疫吸附測定(ELISA)和Westernblot法鑒定抗體的免疫學活性。     pET20b(+)-AP/BL21(DE3)plysS工程菌在Luria-Bertani(LB)培養基(pH值為7.2)上培養,至表示菌體密度的光密度值OD600nm=0.6時加入1.0mmol·L-1異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG),30℃誘導培養4h,rPAc的可溶性表達量最高。以純化的rPAc免疫BALB/c小鼠,制備抗rPAc多克隆抗體,ELISA法測定抗體效價為1:6000,Westernblot法鑒定出該抗體可特異性識別rPAc。
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