近期,天津醫科大學第二醫院口腔科研究人員發表論文,旨在探討miR-124對口腔鱗狀細胞癌CAL27細胞增殖活性的影響以及其與EZH2的靶向關系。研究指出,miR-124的過表達能夠顯著抑制口腔鱗狀細胞癌CAL27細胞的增殖,並且與EZH2之間存在具有良好的靶向關系。該文發表在2015年第07期《口腔醫學研究》雜志上。
構建pre-miR-124、野生型EZH2(EZH2-WT)和突變型EZH2(EZH2-MT)真核表達載體,采用熒光實時定量PCR(qRT-PCR)檢測pre-miR-124的轉染效率,MTT法檢測miR-124過表達對CAL27細胞增殖活性的影響;另外,利用雙熒光素酶報告基因系統、qRT-PCR和Westernblot驗證miR-124與EZH2的靶向關系。
采用NCBIBLAST軟件比對載體測序,結果顯示pcDNATM6.2-GW-pre-miR-124、pmirGLO-EZH2-WT和pmirGLO-EZH2-MT表達載體構建成功,qRT-PCR顯示轉染pre-miR-124後CAL27細胞內miR-124的表達水平顯著升高(P<0.001)。MTT分析結果顯示miR-124過表達能夠明顯抑制CAL27細胞的增殖活性(P<0.05),雙光素酶報告基因顯示共轉染pre-miR-124和EZH2-WT的CAL27細胞熒光活性顯著下降(P<0.001),且qRT-PCR的結果也顯示轉染pre-miR-124的CAL27細胞內EZH2的表達水平明顯低於對照組(P<0.001),Westernblot顯示miR-124的過表達能夠顯著抑制EZH2蛋白水平的表達。